IHC badania - pomoc w rozszyfrowaniu biologii raka piersi

Pomimo faktu, że coraz więcej klinik zaczynają wykorzystywać techniki fenotypowania genetyczny guzów IHC badania pozostaje obecnie głównym narzędziem w rozszyfrowaniu biologii raka piersi, w przewidywaniu jej przyszły rozwój „przewidywań” odpowiedzi guza na planowane leczenie.

W tym artykule dowiesz się, co immunohistochemiczne (IHC) badanie, znaczenie IHC ma raka piersi.

Histochemicznymi (sekcje) w barwieniu histologicznym

Przed patolog (morfologia) rozpoczyna się pod mikroskopem tkanki piersi część uzyskanego z biopsji, konieczne jest farbować swoje specjalne barwniki.

Histochemiczne barwniki stosowane na cienkim przekroju obszaru tkanki zobaczyć pod mikroskopem komórek, które są tam obecne, ich rozmieszczenie w stosunku do siebie (struktura tkanki). Mikroskop świetlny jest rutynową metodą studiowania barwione skrawki tkanek, powszechnie stosowany w diagnostyce raka piersi. Najczęstszymi skrawki barwienie za pomocą:

• Hematoksyliną - plam na jądro komórkowe w ciemnym kolorze niebieskim;
• Eozyną - making różowy cytoplazmy komórek. Dzieląc je hematoksyliną-eozyną z zwanego barwienia.

Co jest immunohistochemiczne (IHC)

Patolog - lekarz, który długo studiował na Akademii Medycznej, aby wiedzieć, jak korzystać z mikroskopu rozróżnić zabarwione komórki rakowe odcinki od normalnej tkanki. Zazwyczaj diagnoza (łagodne lub złośliwe patologia jest) jest wystarczający do tego, pod mikroskopem sekcjach tkanki barwionego hematoksyliną i eozyną. Ale czasami to nie wystarcza. W tej sytuacji pomoc przychodzi immunohistochemicznych, który jest identyfikacja morfologiczne komórek i tkanek dodaje składnik immunologiczny.

metody immunohistochemiczne (IHC), detekcja morfologicznych komplementarnych do komórek i tkanek przy użyciu przeciwciał znanych antygenów, które są specyficzne dla pewnych typów komórek i składników komórkowych. Położenie tych przeciwciał można zobaczyć przy użyciu mikroskopii świetlnej, ponieważ przeciwciała zawierają wizualnie rozpoznać tag.

Pierwsza analiza technika immunohistochemiczne z rakiem sutka za pomocą przeciwciał z dołączonymi znacznikami fluorescencyjnymi, co wymaga stosowania specjalnego mikroskopu fluorescencyjnego, co umożliwia rozmieszczenie tych przeciwciał patrz nacięcia w tkance piersi.

W ciągu ostatnich 30 lat znacząco upraszcza techniki, który jest używany do badań IHC raka sutka poprzez zastosowanie specyficznych przeciwciał (przeciwciało monoklonalne) ze znacznikiem enzymatycznym. To z kolei pozwoliło na zastosowanie mikroskopu świetlnego z badań immunohistologiczne raka piersi, która jest znacznie tańsza, a więc bardziej dostępne. Jednakże, pierwiastki promieniotwórcze (peroksydaza, fosfataza alkaliczna i fluoresceina), co czasami nie nie wymagają specjalnych technik i jest wciąż szeroko stosowana.

Konieczność korzystania immunohistochemicznych w raku piersi, kontrolować jego jakość i interpretacja wyników powinny być monitorowane oddziale patologii. Istotne jest, że dane uzyskane w badaniach IHC dekodowania tylko w połączeniu z morfologiczną analizą tkanki piersi, uzyskane przez barwienie hematoksyliną i eozyną.

Dziś immunohistochemicznych w raku piersi jest najbardziej rutynowa metoda morfologicznych (histopatologicznych) laboratoria i wykorzystywane do celów diagnostyki i prognostycznej, jak predykcyjnej (metoda) funkcjonują jako wskaźnik raka piersi w przyszłości.

Diagnoza raka piersi i IHC

Kiedy patolog widzi pod materiałem mikroskop biopsji, że ma do czynienia z dwóch podstawowych zadań diagnostycznych: ustalenie pochodzenia komórek nowotworowych, w których były one (w kanałach, w zrazików, lub w innych częściach piersi) i potwierdzić lub wykluczyć ich inwazję pobliskich tkanek.

Markery diagnostyczne IHC użyte do raka piersi

Od pierwszych dni stosowania w onkologii IHC prowadzono poszukiwania nowych i ulepszonych technik wykorzystywać istniejące przeciwciała, które mogłyby zidentyfikować komórki antygenów z wysoką swoistością i czułością. Następujące markery IHC są obecnie szeroko stosowane w celu wyjaśnienia histopatologiczne rozpoznanie raka piersi:

cytokeratyny

• CK5, CK10, CK14 i CK17 jest cytokeratyny warstwy podstawnej nabłonka, komórka mioepitelialna ekspresji.
• CK5 / 6 lub „podstawne cytokeratyny” pomóc zidentyfikować normalne piersi komórka mioepitelialna jak również laminarny (wydzielającej).
• 34 12: Przeciwciało pozwala rozpoznać cytokeratyny 1, 5, 10 i 14.

Markery mięśni gładkich

• H caldesmon. Można go znaleźć tylko w przewodowych piersi komórka mioepitelialna, więc ma wysoką specyficzność.
• Aktyny mięśni gładkich (SMA). Przeciwciało to pomaga wykryć aktyny w mikrofilamentah- niskiej specyficzności, ponieważ SMA jest wykrywany w fibroblastach (w tkankach, które zostały zregenerowane).
• łańcuch ciężki miozyny mięśnia gładkiego (SMMHC) - podzespół konstrukcyjny w miozyny mięśnia gładkiego izoformy SM2. Wyrażone myoepithelial komórek piersi, ma wysoką czułość i specyficzność, jak SMMHC występujące tylko na komórka mioepitelialna umieszczone w kanałach i płatów z gruczołu przysadki, ale nie w fibroblastach tkanki gruczołu.
• kalponina - polipeptyd 34 kDa, moduluje aktywność actomyosin. Dobra czułość, ale jest obecny w gruczole fibroblastów tkanki łącznej.
• P63-p53 homolog - Znacznik jądrowa jest bardzo wrażliwe komórka mioepitelialna.
• KALII: Endopeptid, co wyraża się komórka mioepitelialna.
• P-cadheriN - cząsteczka adhezji komórek o wysokiej wrażliwości na myoepithelial komórek normalnej tkanki piersi. To nie reaguje z fibroblastów.

inne markery

• E-kadheryny - cząsteczka adhezji komórkowej. Jest on używany do odróżnienia raka przewodowego „w suti” (DCIS) o zrazikowego. Rak „w suti” (LCIS) - DCIS zazwyczaj identyfikowane poprzez barwienie błony, w przeciwieństwie do LCIS, w którym nie jest.
• markery czerniaka: S100, Melan-A, HMB45.
• markery limfocytów: CD20, LCA, CD15, CD30.
• Markery śródbłonka naczyniowego: CD31, CD34, czynnik VIII D2-40 (podoplanin).
• Markery proliferacji komórek: Ki67 MIB-1, PPh3.
• markery apoptozy: Bcl-2 i Bax, Bcl-X.

Przykłady użycia IHC w celu rozwiązania problemów napotykanych przy określaniu patologii piersi

Istnieje wiele sytuacji, w których immunohistochemia przyczynia się do sformułowania ostatecznej diagnozy histopatologicznej w patologii piersi:

• Barwienia błony komórkowej kadherynie eliminuje powstawanie nowotworu zrazikowego (ALH) i LCIS. Brak barwienia błony komórkowej nowotworu zrazikowego sprzyja.
• Normalny rozrost nabłonka, nabłonkowe atypii lub tego czy innego DCIS. W łagodnego przerostu może wykryć reaktywności CK5 / 6 i CK14, natomiast z atypowym rozrostem i DCIS nie.

Ten mikro-inwazyjny rak czy coś innego? Zastosowanie myoepithelial markery komórek jest kluczowa dla ustalenia, czy nie inwazję raka (mikro inwazji warstwy laminarny komórka mioepitelialna). Reaktywność fibroblastów, szczelina w barwienia komórek myoepithelial barwienie komórek mięśni gładkich naczyń krwionośnych może powodować trudności w interpretacji obserwowanego wzór pod mikroskopem. Dwa markery komórka mioepitelialna stosowane w tej sytuacji, na przykład, p63 i SMMHC lub ASMA lub kalponina.

Co markerów IHC są wykorzystywane w panelach diagnostycznych w patologii piersi

Zestaw markerów (panel diagnostyczny), który jest stosowany w badaniach IHC w raku piersi, w dużej mierze zależy od wyposażenia laboratorium, w którym do prowadzenia immunohistochemicznych i doświadczenia lekarza prowadzącego go. Poniżej znajdują się zalecenia, które powinny być panel IHC stosowane przy patologii piersi, pod jedną z klinik:

• Łańcuchy ciężki miozyny mięśnia gładkiego (SMMHC) lub kalponina - czułych i specyficznych wskaźników do cytoplazmy komórka mioepitelialna;
• Aktyny mięśni gładkich może być używany, ale nadal w interpretacji należy pamiętać, że jest on obecny w fibroblastach (stan zapalny i blizny);
• P63 jest czuły i specyficzny znacznik do jąder myoepithelial komórek barwiących, ale może być nieciągły. Zastosowanie markera myoepithelial cytoplazmie komórek, takich jak SMMHC lub kalponina powinny być stosowane w celu uniknięcia problemów z interpretacji obrazu uzyskanego.

Podczas próby w celu określenia obecności lub braku komórka mioepitelialna i p63 powinny być stosowane SMMHC lub kalponina.

Rola badań immunohistochemicznych w definicji „przyszłościowe” i „w” czynników prognostycznych raka piersi

Czynniki prognostyczne dostarczyć informacji na temat możliwego zachowania na raka piersi w chwili rozpoznania i są niezależne od terapii. Oznacza to, że za pomocą nich można ocenić, jak będzie rozwijać się szybko i rak, odpowiednio, w zależności od tego, aby zdecydować, jak dużo i leczenie preferencje w każdej sytuacji.

Z kolei „predykcyjną” (przewidywania) czynniki dostarczają informacji, które daje wskazanie prawdopodobieństwa odpowiedzi guza do konkretnej terapii. Pomimo faktu, że prognostyczne i predykcyjne czynniki mogą organizować oddzielnie w rozpoznawaniu i klasyfikacji raka piersi częściej są one zarówno prognostyczne i predykcyjne.

Na przykład, obecność wysokiej ekspresji HER2. Jeśli rak piersi HER2 dodatni (duża ilość białka HER2 w nowotworze), trwa agresywna, z wczesnych przerzutów do odległych narządów. Ale jeśli guz zawiera niewielką ilość tego białka (rak piersi HER2 ujemny), to nie będzie reagował na zastosowaniu leku Herceptin docelowej.

"Basal" markerów IHC

Istnieje podział Rak piersi w zależności od tego, jaką jego ekspresji genów komórki (profilu ekspresji genowej). Guzy profilu, który jest charakterystyczny dla podstawowego lub myoepithelial komórek prawidłowego sutka, pokazuje obecność „podstawowych” markerami. Takie nowotwory mają słabe rokowania. W większości z tych „podstawowych” nowotworów całkowicie nieobecny ER, PR (receptory estrogenów i progesteronu) i białka HER2. Oni często przerzuty do mózgu, płuc.

Obecnie nie ma zgody na profilu immunohistochemiczne (IHC markerów, które powinny być stosowane), co jasno zdefiniować „podstawne” kraby. Guzy te ze złą prognozą obejmuje tak zwane „triple rakiem piersi”, w którym nie ER PR i HER2, ale wyrażone podstawne cytokeratyny 5/6 i 14, receptor czynnika wzrostu naskórka (EGFR) i c-Kit. Mogą też wyrazić P-kadheryny i często P63.

Istnieją podobieństwa między „podstawowej” raka piersi i nowotworów, które są wykrywane u kobiet z mutacją BRCA1 a.

EGFR jest często wyrażone w „podstawowych” nowotworów więc pacjenci z tych guzów może skorzystać na leczeniu inhibitorami EGFR.

IHC znaczniki proliferacji (szybkość wzrostu nowotworu)

Liczbę lub odsetek komórek mitotycznych w mitozę, od dawna uważane morfologiczny „biomarker” rak rokowania. Istnieje wiele znaczników IHC, które wykazują aktywność proliferacyjną komórek (liczbę mitoz)

• Ki67 - antygen, który ulega ekspresji w jądrach komórek we wszystkich fazach cyklu komórkowego, i jest użytecznym markerem proliferacji komórkowej;
• MIB1 - przeciwciało reaguje z Ki-67 w tkance lub utrwalonej formaliną parafina;
• PPh3.

IHC markerów apoptozy

Apoptoza, czy „zaprogramowane samobójstwo komórka„jest biomarker agresywne nowotwory. apoptotycznych białka mogą być zidentyfikowane przez IHC:

• Bcl-2;
• Bax;
• Bcl-X.

Inne „prognozujące” markery

• p53. Mutacje w genie p53 supresorem nowotworu (TP53), wykrywa się w 20-30% przypadków raka piersi. Te mutacje genowe są częstsze u kobiet z dziedzicznymi zespołami raka piersi niż kobiety z rakiem sporadycznym. U chorych z genetyczną predyspozycją do raka piersi może być zalecana testowanie p53. Wykrycie mutacji p53 jest również uważane jako ewentualnego prognostyk odpowiedzi na chemioterapię raka piersi, ale wykrywanie białka p53 przez immunohistochemicznych w nowotworze nie odzwierciedla status mutacji p53.
• Topoizomerazy II-alfa. Jest to celem, do którego działanie jest skierowany antracykliny - chemioterapeutyczny lek, która jest często stosowana w leczeniu raka sutka.